第一部分 细胞工程
实验1-1培养基母液的配制
实验1-2 培养基配制与灭菌
实验1-3 植物材料的消毒与接种
实验1-4 愈伤组织诱导及悬浮细胞培养
实验1-5 植物茎尖脱毒与病毒检测
实验1-6 胚状体诱导技术
实验1-7 花药培养及花粉发育时期的鉴定
实验1-8 胚挽救技术
实验1-9 原生质体分离与纯化
实验1-10 原生质体培养
实验1-11原生质体融合
实验1-12 植物离体培养诱导开花
实验1-13 兰花原球茎快繁
实验1-14 香蕉快繁技术
实验1-15 离体种质保存
第二部分 基因工程
实验2-1 基因组 DNA 提取
实验2-2 RNA 提取与逆转录
实验2-3 核酸琼脂糖凝胶电泳
实验2-4 核酸定量
实验2-5 PCR 基本技术
实验2-6 DNA 连接、感受态细胞制备与转化
实验2-7 质粒提取与重组质粒的酶切鉴定
实验2-8 重组质粒的 PCR 鉴定
实验2-9 RACE 克隆全长基因
实验2-10 愈伤组织或悬浮细胞与根癌农杆菌共培养转化
实验2-11上胚轴与根癌农杆菌共培养转化
实验2-12-叶盘与农杆菌共培养转化
实验2-13 子叶与农杆菌共培养转化
实验2-14 生殖器官与农杆菌共培养转化
实验2-15 原生质体 PEG 介导转化
实验2-16 发根农杆菌介导的目的基因转化
实验2-17 基因枪转化外源基因
实验2-18 GUS或 GFP检测
实验2-19 Southern杂交
实验2-20 RT PCR 技术
实验2-21 Real timePCR 技术
实验2-22 Northern杂交
实验2-23 蛋白质的定量
实验2-24 Western杂交
实验2-25 基因的亚细胞定位技术
实验2-26 目的基因在大肠杆菌中的诱导和表达
实验2-27 目的基因在酵母中的诱导和表达
实验2-28 酵母单杂交技术
实验2-29 酵母双杂交技术
实验2-30 双分子荧光互补分析
实验2-31 植物启动子的功能分析
实验2-32 凝胶迁移实验
第三部分 DNA 分子标记
实验3-1 RAPD 分子标记
实验3-2 AFLP分子标记
实验3-3 SSR 分子标记
实验3-4 ISSR 分子标记
实验3-5 SRAP分子标记
实验3-6 SCoT 分子标记
附录
附录1 常用培养基和本书所用培养基配方
附录2 常用植物生长调节剂的配制
附录3 常用抗生素的配制与使用
附录4 常用试剂及缓冲液的配制
附录5 凝胶电泳中 DNA 和蛋白质的有效分离范围
附录6 同位素 (α-32-P)操作注意事项
园艺植物生物技术的发展日新月异,为反映该领域的最新技术,适应培养园艺植物生物技术创新人才培养的要求,培养学生们的动手能力,作为《园艺植物生物技术》的配套教材,特编辑《园艺植物生物技术实验指导》教材。全书分三个部分,即细胞工程、基因工程和DNA分子标记。细胞工程部分选编了15个实验内容,包括培养基母液的配制、培养基配制与灭菌、植物材料的消毒与接种、愈伤组织诱导及悬浮细胞培养、植物茎尖脱毒与病毒检测、胚状体诱导技术、花药培养及花粉发育时期的鉴定、胚挽救技术、原生质体分离与纯化、原生质体培养、原生质体融合、植物离体培养诱导开花、兰花原球茎快繁、香蕉快繁技术、离体种质保存;基因工程部分选编了32个实验内容,包括基因组DNA提取、RNA提取与逆转录、核酸琼脂糖凝胶电泳、 核酸定量、PCR基本技术、DNA连接和感受态细胞制备与转化、质粒提取与重组质粒的酶切鉴定、重组质粒的PCR鉴定、RACE克隆全长基因、愈伤组织或悬浮细胞与根癌农杆菌共培养转化、上胚轴与根癌农杆菌共培养转化、叶盘与农杆菌共培养转化、子叶与农杆菌共培养转化、生殖器官与农杆菌共培养转化、原生质体PEG介导转化、发根农杆菌介导的目的基因转化、基因枪转化外源基因、GUS或GFP检测、Southern杂交、RTPCR技术、Realtime PCR技术、Northern杂交、蛋白质的定量、Western杂交、基因的亚细胞定位技术、目的基因在大肠杆菌中的诱导和表达、目的基因在酵母中的诱导和表达、酵母单杂交技术、酵母双杂交技术、双分子荧光互补分析、植物启动子的功能分析、凝胶迁移实验;DNA分子标记部分选编了6个实验内容,包括RAPD、AFLP、SSR、ISSR、SRAP和SCoT分子标记。所有实验均包含实验目的和原理、试材及器具、实验步骤、思考题与作业,除此之外,作者还结合自己的实验经验,增加了操作提示的内容,目的是使初学者尽快掌握园艺植物生物技术的实验操作技术。书后有附录,内容包括常用培养基和本书所用培养基配方、常用植物生长调节剂的配制、常用抗生素的配制与使用、常用试剂及缓冲液的配制、凝胶电泳中DNA和蛋白质的有效分离范围和同位素(α32P)操作注意事项。
本书适用于园艺专业生物技术方向本科生和研究生实验教学,也可供相关科研人员参考。
《园艺植物生物技术实验指导》作为《园艺植物生物技术》的配套教材,是为了适应调整后的园艺专业及园艺生物技术方向的培养要求编写的。园艺植物生物技术实验是学习和掌握园艺植物生物技术的基本原理、基本知识和基本操作技能的重要环节。改革和加强实验教学,对培养学生动手能力和创新精神至关重要。
全书分为细胞工程、基因工程和DNA分子标记三个部分,共介绍了53个园艺植物生物技术实验。各个实验除了介绍实验目的和原理、试材及器具、实验步骤、思考题与作业之外,作者还结合自己的实验经验,增加了操作提示的内容,目的是使初学者尽快掌握园艺植物生物技术的实验操作技术。
由于时间仓促和水平所限,书中难免有纰漏和欠妥之处,请各位读者不吝赐教。
编者
2016年5月于广州五山